مالتی پلکس ایمونوشیمی برای اعتبار سنجی تحلیلی تومور جامد

محتوای حمایت شده توسط تحقیقات سربا16 مارس 2023بررسی شده توسط لویی کاستل

مشخص کردن دقیق را میکرو محیط تومور زمانی که دسترسی به نمونه بافت وجود دارد محصور می تواند باشد کلید چالش در ایمونوآنکولوژی رشته. تعادل و نفوذ تومور T–زیرجمعیت های سلولی هستند قابل توجه علاقه. در این مصاحبه نیوزمدیکال صحبت می کند Cerba تحقیق در استفاده و ارزش مولتی پلکس ایمونوشیمی تنظیمی T برای اعتبار سنجی تحلیلی تومور جامد

سلول های T چیست و چرا اهمیت دارند؟

سلول های T به طور معمول به عنوان سلول های کمکی (Th)، سیتوتوکسیک (Tcyto)، حافظه یا تنظیم کننده (Treg) طبقه بندی می شوند. سلول‌های T به عنوان سلول‌های مؤثر ایمنی مهم در نظر گرفته می‌شوند، و آنها را به اهداف ترجیحی برای تعدیل ایمنی تبدیل می‌کند. سلول های Tcyto پاسخ های ایمنی بهینه را ارائه می دهند و در برابر میکروب های مهاجم و آنتی ژن های تومور محافظت می کنند. تحت شرایط هموستاتیک، Tregs تحمل محیطی را تشویق می کند. با این حال، در مورد تومورها، Tregs ممکن است عملکرد سلول Tcyto را سرکوب کند.

پروتکل مالتی پلکس چیست و چگونه ایجاد شد؟

Cerba Research پروتکل مالتی پلکس، Histoprofile را توسعه داد^®– پنل نوری T-reg، با استفاده از پلت فرم Discovery ULTRA (Ventana)، که برای رنگ آمیزی زیر جمعیت های سلول های T خاص در یک اسلاید طراحی شده است. این امر از نیاز به بخش‌های سریالی از نمونه‌های گران‌بهای پارافین تثبیت‌شده با فرمالین (FFPE) بیمار در آزمایش‌های بالینی جلوگیری کرد، در حالی که هنوز تجزیه و تحلیل جامعی از ریزمحیط تومور ارائه می‌دهد.

پروتکل مالتی پلکس بر روی یک نمونه FFPE سرطان ریه سلول غیر کوچک بهینه شده و از قبل تأیید شد. اعتبار تحلیلی شامل تست‌های ویژگی، حساسیت، دقت و پایداری آنتی‌ژن بر روی لوزه‌های سالم (شاهد) و نمونه‌های پاتولوژیک پستان، ریه، سر و گردن و کولون FFPE بود که از Biobank بیوبانک Cerba Research Montpellier تهیه شد.

آیا می توانید یک برنامه خاص را که شامل Histoprofile است توضیح دهید^®– پروتکل مالتی پلکس تابلو نور T-reg؟

برای ارزیابی Histoprofile^®ویژگی پروتکل نور T-reg، پروتکل مالتی پلکس برای بررسی نمونه‌های لوزه انسان سالم (کنترل‌های منفی/مثبت) استفاده شد. یک TMA چند بافتی سالم مورد تایید FDA شامل 33 بافت مختلف از سه اهداکننده بود. در این برنامه، یک پاتولوژیست ویژگی سه نشانگر زیستی را در تمام بافت‌های آزمایش شده تأیید کرد.

Histoprofile^®پروتکل نور Tregs بر روی طیف وسیعی از نمونه‌های FFPE تومور جامد، از جمله سرطان ریه سلول غیر کوچک (NSCLC)، سرطان سینه سه‌گانه منفی (TNBC)، کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن (HNSCC) و سرطان کولورکتال (CRC) آزمایش شد. ).

یک TMA سرطان چند عضوی بلوک های بافتی را تکمیل می کند تا تعداد کافی نمونه برای هر نشانه ارزیابی شود. سپس یک پاتولوژیست اسلایدها را برای ارائه یک تجزیه و تحلیل نیمه کمی از اهداف و تایید ویژگی، نمره گذاری کرد.

دقت تحلیلی Histoprofile چگونه است^®– پانل نور T-reg ارزیابی شده است؟

برای ارزیابی دقت تحلیلی Histoprofile^®پروتکل نوری T-reg، ما تکرارپذیری درون و بین دو را روی دو نمونه سرطان سینه، ریه، کولورکتال و سر و گردن انجام دادیم. در این ارزیابی، اسلایدها با Halo برای تراکم سلول مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. سپس میانگین CV تمام نمونه‌ها برای هر نوع بافت و تومور جامد محاسبه شد.

هنگام استفاده از تراکم سلولی مثبت برای CD3، CD8، و FoxP3 به عنوان بازخوانی برای پروتکل، ممکن است معیارهای پذیرش (CV<20٪) برای تومورهای جامد برآورده شود. برای CD3، CV 21٪ است، اما در Cerba Research، ما این را به دلیل تراکم سلولی مثبت کم (<5٪ از کل سلول ها) کافی می دانیم.

چگونه می خواهید پایداری آنتی ژن را آزمایش کنید؟

برای ارزیابی پایداری اهداف در Histoprofile^®پروتکل نور T-reg، یک آزمایش سینتیک برای تجزیه و تحلیل همان نمونه قدیمی در یک دوره زمانی (از تازه تا سه ماه) ضروری است. این آزمایش معمولاً با استفاده از دو نمونه در هر اندیکاسیون با دامنه‌های متفاوت بیان سیگنال انجام می‌شود.

با گذشت زمان، تصاویر حاصل از یک نمونه NSCLC با نرم افزار تجزیه و تحلیل تصویر Halo مورد ارزیابی قرار گرفت. اسلایدهای موجود در تست پایداری با نرم افزار Halo مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند تا تراکم سلولی هر هدف از مالتی پلکس مشخص شود.

بیومارکرهای کلیدی که درمان موثر را نشان می دهند کدامند؟

نفوذ سلول T به تومور یک بیومارکر کلیدی برای تخمین پاسخ به درمان‌های ایمنی نقطه بازرسی است. در یک مطالعه خاص، پنج نمونه سرطان کولورکتال (CRC) با Histoprofile رنگ‌آمیزی شدند^®پانل نوری T-reg و سپس با Halo آنالیز شد تا چگالی سلول‌های CD8 T و سلول‌های Treg در بخش‌های تومور و استروما و تراکم جمعیت‌های سلولی در مرز تومور/استروما تعیین شود.

در این مورد خاص، Tregs به طور قابل توجهی در استروما نسبت به تومور وجود داشت (0.026 = p). به طور مشابه، سلول‌های T بیشتری در محفظه استرومایی نسبت به تومور وجود داشت، اما در سطح معنی‌داری نبود (0.096 = p). تجمع سلول های T و سلول های Tregs در سمت استرومایی رابط مشاهده شد.

چه چیزی باعث ایجاد Histoprofile می شود^®– پروتکل چندگانه پانل نوری T-reg یک ابزار برجسته برای مطالعه جمعیت های T-Cell است؟

پس از نشان دادن ویژگی و حساسیت واضح، عملکرد تحلیلی Histoprofile^®پروتکل نوری T-reg با استفاده از anti-CD8، anti-CD3 و anti-FoxP3 توانایی تشخیص سلول های Tcyto و Treg را در طیف وسیعی از تومورهای جامد، از جمله، اما نه محدود به، ریه، سر و گردن، سینه، و بافت های FFPE سرطان کولورکتال پروتکل معیارهای پذیرش را در رابطه با تکرارپذیری و تکرارپذیری بین سنجش برآورده کرد.

پایداری آنتی ژن نشان می دهد که تشخیص آنتی ژن ها در سطحی مشابه بخش های تازه پس از سه ماه امکان پذیر است. در Cerba Research، Histoprofile^®پروتکل نور T-reg بر روی تومورهای جامد در سطح نقطه پایانی تجربی تایید شده است.

تجزیه و تحلیل فضایی پروتکل یک تجزیه و تحلیل عمیق از ریزمحیط تومور را ارائه می دهد، که اجازه می دهد تا از نفوذ سلول های ایمنی به داخل تومور قدردانی شود. ما معتقدیم که Histoprofile^®– پانل نوری T-reg ابزاری کاربردی است که بررسی جمعیت سلول های T را در تومورهای جامد مختلف انسانی در آزمایشات بالینی تسهیل می کند.