در مطالعه اخیر منتشر شده در واکسن هامحققان در مورد ایمنی زایی یک رژیم واکسن هترولوگ علیه IBV (ویروس برونشیت عفونی) گزارش کردند که شامل دوزهای اولیه پلاسمید محصور شده با کیتوزان با کیتوزان (QuilA) و دوز تقویت‌کننده MVA (واکسینیا آنکارا اصلاح شده) است.
زمینه
IBV باعث عفونت حاد ریوی در جوجه ها می شود. واکسن‌های اصلاح‌شده واکسینیا آنکارا می‌توانند به حالت بیماری‌زایی بازگردند، با زیرگروه‌های سرولوژیکی در گردش ترکیب شوند و منجر به آسیب بافتی در میان گونه‌های پرندگان واکسینه شده شوند. نویسندگان قبلاً اثربخشی و ایمنی ضد IBV واکسیناسیون اسید دئوکسی ریبونوکلئیک pCAG-N (DNA) (pQAC-N) با نانوذرات پیچیده QAC را در بین جوجه ها نشان داده بودند.
در مورد مطالعه
سلول های ریوی جوجه های پلاسمید DNA/MVA-نوکلئوکپسید واکسینه شده با QAC پس از تحریک آنتی ژن نوکلئوکپسید در مقایسه با جوجه های آنکارا-نوکلئوکپسید اصلاح شده 2.0X و جوجه های گروه کنترل، تکثیر قابل توجهی بیشتری نشان دادند. افزایش در گیرنده سلول T در حال تکثیر (TCR)-γδ+ و خوشه لنفوسیت های T تمایز 8+ (CD8+) به دنبال تحریک نوکلئوکپسید در بین DNA پلاسمید محصور شده با QAC/واکسینیا اصلاح شده آنکارا-نوکلئوکپسید با جوجه های کنترل شده مشاهده شد. در حالی که تکثیر لنفوسیت T کمک کننده (اما غیر قابل توجه) بیشتر (اما غیر قابل توجه) در جوجه های اصلاح شده واکسینه شده با ویروس زنده مشاهده شد.
گروه اول و دوم، هر کدام از هشت جوجه، به صورت داخل بینی با سالین بافر فسفات (کنترل منفی) و ویروس زنده تجاری اصلاح شده آرکانزاس (MLV، کنترل مثبت) تلقیح شدند. گروه سوم و چهارم هر کدام 10 قطعه جوجه با 10 قطعه واکسینه شدند8 واحدهای تشکیل پلاک به ازای هر پرنده MVA-N در روز اول، به دنبال آن تزریق دوز تقویت کننده همولوگ دو هفته بعد به صورت داخل بینی، یا 100.0 میکروگرم در هر پرنده pQAC-N در روز اول و سپس هترولوگ 108 واحدهای تشکیل پلاک در هر دوز تقویت کننده MVA-N پرنده دو هفته بعد به صورت داخل بینی.
پرندگان 21 روزه با 10 مورد به صورت داخل بینی چالش شدند7 EID50 (50 درصد از دوز عفونی جنین) PER پرنده از سویه های بدخیم IBV آرکانزاس DPI. پس از 10.0 روز و 20.0 روز از واکسیناسیون اولیه و 3.0 روز چالش، نمونه‌های مایع اشکی و نمونه‌های سرم به‌دست آمدند و با استفاده از روش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) آنالیز شدند.
به طور کلی، یافته‌های مطالعه نشان داد که واکسن‌های تقویت‌کننده واکسینیا Ankara با DNA هترولوگ اصلاح‌شده در مقایسه با واکسن‌های همولوگ 2.0x اصلاح‌شده واکسینیا آنکارا-نوکلئوکپسید در محافظت از جوجه‌ها در برابر IBV مؤثرتر بودند.
حفاظت اعطا شده شبیه به حفاظتی بود که توسط پلاسمید QAC کپسوله شده با DNA اصلاح شده واکسینیا Ankara-nucleocapsid، نشان می دهد که افزودن MPLA عملکرد واکسن های تجربی را افزایش نمی دهد.
نتیجه
رژیم واکسیناسیون هترولوگ پاسخ لنفوسیت T قوی را القا کرد. جوجه‌های واکسینه‌شده با رژیم تقویتی واکسینیا آنکارا اصلاح‌شده با DNA، در مقایسه با واکسیناسیون‌های همولوگ، در مقایسه با واکسیناسیون‌های همولوگ، در نمونه‌های مایع اشکی و نمونه‌های سواب نای، امتیازهای شدت بالینی و بیش از ۲ برابر بار ویروسی کمتری را در نمونه‌های مایع اشکی و نمونه‌های سواب نای واکسینه کردند.
کاهش قابل توجه بارهای ویروسی در بین نمونه‌های مایع اشکی و نمونه‌های سواب تراشه پرندگان واکسینه شده با pQAC/واکسینیا اصلاح‌شده با آنکارا مشابه سطوح مشاهده‌شده در بین جوجه‌های واکسینه آنکارا با نوکلئوکپسید اصلاح‌شده با 2.0X بود، مطابق با امتیاز بالینی.
این تیم CEF (فیبروبلاست‌های جنینی مرغ) را از جنین‌های SPF (بدون پاتوژن خاص) تخم مرغ جنین شده لهورن سفید (ECEs) برای تایید بیان سویه IBV Arkansas DPI از ساختار واکسن تهیه کردند. سازه ها با استفاده از نانوذرات QAC بارگذاری شده با p-CAGN، سوبستراهای نوکلئوکپسید بیانگر واکسینیا آنکارا اصلاح شده و سوبستراهای تترمتیل بنزیدین (TMB) تهیه شدند. اثربخشی ساختار DNA پلاسمید بسته بندی شده با QAC/واکسینیا اصلاح شده آنکارا-نوکلئوکپسید در بین چهار گروه از جوجه ها مورد بررسی قرار گرفت.
نمرات شدت علائم عفونت IBV یک بار در روز برای همه جوجه ها طی هشت روز پس از چالش ثبت شد. نمونه‌های سواب تراشه و نمونه‌های مایع اشکی برای اسید ریبونوکلئیک IBV (RNA) توسط آنالیز واکنش زنجیره‌ای رونویسی-پلیمراز معکوس کمی (qRT-PCR) نوکلئوکپسید ویروس برونشیت عفونی مورد ارزیابی قرار گرفتند.
ایمونوگلوبولین (Ig)-A و -Y هدف‌دار IBV در جوجه‌های اصلاح‌شده واکسینه شده با ویروس زنده در مقایسه با گروه جوجه کنترل غیرایمن‌شده PBS به‌طور قابل‌توجهی بیشتر بود. با این حال، تیتر Ig در بین جوجه های واکسینه شده با هر یک از رژیم های واکسن در مقایسه با جوجه های غیر واکسینه به طور قابل توجهی بیشتر نبود.
دوزهای هترولوگ واکسن‌های DNA پلاسمید بسته‌شده با QAC/واکسن‌های آنکارا-نوکلئوکپسید اصلاح‌شده، حفاظت قابل‌توجهی در برابر IBV نسبت به دوزهای همولوگ واکسینیا آنکارا-نوکلئوکپسید اصلاح‌شده 2.0X ارائه کردند. حفاظت ایمنی ممکن است به دلیل القای پاسخ حافظه با واسطه سلولی قوی باشد که توسط DNA پلاسمید محصور شده با QAC/واکسینیا آنکارا-نوکلئوکپسید اصلاح شده در بافت های ریوی تنظیم می شود.
پس از آن، آنالیز ELISA با هدف IBV و آنالیز فلوسیتومتری انجام شد و بارهای ویروسی اندازه‌گیری شد. بیان آنتی ژن N-6xHis از واکسن های MVA-N با قرار دادن پروتئین های موجود در سلول های آلوده به MVA-N به تجزیه و تحلیل وسترن بلات تأیید شد. سنجش تکثیر لنفوسیت T با هدف آنتی ژن برای ارزیابی توانایی واکسن‌های تجربی برای القای پاسخ‌های ایمونولوژیک سلولی با واسطه سلولی هدف‌دار IBV (محلی) انجام شد.
نتایج
در مطالعه حاضر، محققان حفاظت ایمنی اعطا شده توسط واکسیناسیون DNA اولیه هترولوگ و واکسیناسیون تقویت کننده MVA را در مقایسه با واکسیناسیون MVA همولوگ در بین جوجه ها علیه IBV ارزیابی کردند.
در میان جوجه های SPF واکسینه شده با MPLA (لیپید مونوفسفوریل مصنوعی A) + واکسن کمکی سه گانه QAC، بارگیری شده با پلاسمید pCAG-نوکلئوکپسید در روز اول، و واکسن اصلاح شده آنکارا-نوکلئوکپسید (pCAG-N یا pmQACinmodifiedkaracciniamo) بعداً، کاهش نمرات شدت بالینی و بارهای ویروسی در بین نمونه‌های سواب تراشه مشابه جوجه‌های اصلاح‌شده واکسینه شده با ویروس زنده بود.